PREPARACIONES FIJAS

PRACTICA DE LABORATORIO N°5

MONTAJE DE PREPARACIONES FIJAS: COLORACION DE GRAM, COLORACION DE  WRIGHT

OBJETIVOS

• Aprender a montar preparaciones fijas
• Realizar coloraciones para la visualización de organismos microscópicos
• Observar microorganismos mediante la preparación de un frotis bacteriano
• Reconocer la estructura básica de los organismos procariotas y sus agrupaciones

  

MARCO TEORICO

La observación microscópica constituye la primera etapa del estudio de los microorganismos y también del diagnóstico microbiológico ya que permite conocer algunas características de los microorganismos, como su forma, disposición o agrupación, presencia o ausencia de estructuras (cápsulas, esporas, flagelos), movilidad, etc.

Existen numerosas técnicas para la observación microscópica de los microorganismos, de las cuales en el laboratorio son fáciles de realizar las siguientes:

 1. Observación de bacterias vivas:

a) En fresco

b) Con fondo oscuro

2. Observación de bacterias muertas:

a) Con tinción simple

b) Con tinción diferencial

c) Con tinción especial

3. Observación microscópica de hongos

a) Observación en fresco

b) Preparaciones fijas

c) Técnica del microcultivo

Las tinciones y colorantes se usan con frecuencia en biología y en medicina para destacar estructuras en tejidos biológicos para observación, a menudo con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. Las tinciones pueden ser usadas para definir y examinar tejidos en bruto (reslatando, por ejemplo, fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones celulares (clasificando diferentes células sanguíneas, por ejemplo) u orgánulos dentro de células individuales.

MATERIALES Y METODOS

• Microscopio
• Reactivos coloración de GRAM
• Reactivos coloración de WRIGHT
• Mechero
• Laminas portaobjetos
• Aceite de inmersión
• Agua destilada
• palillos
• Guantes
• Isopos estériles
• Yogur

  

OBERVACION DE BACTERIAS

BACTERIAS DEL YOGUR

El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.

1. Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua. Dejar secar unos minutos temperatura ambiente
2. Fijar la muestra pasando la lámina por la llama de un mechero 3 veces. NOTA: al pasar el portaobjetos por la llama no dejarla mucho tiempo para prevenir que esta estalle y evitar alguna quemadura.
3. Realizar la coloración de GRAM
4. Observar al máximo aumento del microscopio.
5. dibujar los observado

BACTERIAS DE LA CAVIDAD OROFARINGEA

1. Con un isopo esteril tomar una muestra de la cavidad orofarina
2. Con la muestra obtenida realizar un extendido sobre una lamina portaobjetos realizando un movimiento circular de adentro hacia afuera procurando que la preparación que no quede muy delgada o muy gruesa
3. Dejar secar al temperatura ambiente
4. Fijar la muestra pasándola por la llama del mechero 3 veces
5. Realizar la coloración de GRAM
6. Observar en el objetivo de inmersión

OBSERVACION DE HEMATIES, LEUCOCITOS Y PLAQUETAS

1. Tomar una lamina con la muestra ( extendido de sangre previamente realizado)
2. una vez la muestra este seca, realizar la coloración de WRIGHT
3. observar en el objetivo de inmersión

 COLORACION DE GRAM

La tinción de Gram o coloración Gram es un tipo de tinción diferencial empleado para la visualización de bacterias

1. Agregar a la muestra AZUL VIOLETA   durante 2 minutos
2. Lavar con agua de la llave
3. Agregar LUGOL durante 2 minutos
4. Lavar con agua de la llave
5. Agregar DECOLORANTE DE GRAM O ACETONA durante 45 segundos
6. Lavar con agua de la llave
7. Agregar FUCSINA durante 45 segundos
8. Lavar con agua de la llave
9. Dejar secar
10. Observar al microscopio

 COLORACION DE WRIGHT

1. Cubrir la lamina con el colorante de WRIGHT durante 3 minutos
2. Adicionar sobre el colorante AGUA DESTILADA
3. Dejar pasar 3 minutos
4. Lavar con agua de la llave
5. Dejar se secar
6. Observar al microscopio

 CUESTIONARIO

1. Cuál es el fundamento de la coloración de gram
2. Cuál es el fundamento de la coloración Wright
3. Que agrupaciones forman los cocos
4. Qué función desempeñan los hematíes
5. Qué función desempeñan los leucocitos y cuales son los diferentes tipo
6. Qué función desempeñan las plaquetas